Poliakrilamid Jel Elektroforezi Nedir?
Jul 29, 2024poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE), biyomolekülleri, özellikle proteinleri ve nükleik asitleri boyutlarına ve yüklerine göre ayırmak ve analiz etmek için biyokimya, moleküler biyoloji ve biyoteknolojide yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Teknik, polimerleştirildiğinde gözenekli bir ağ oluşturan bir madde olan poliakrilamidden oluşan bir jel matrisinin kullanılmasını içerir.
Jel hazırlama sırasında akrilamid monomerleri, genellikle bis-akrilamid olan bir çapraz bağlama maddesi ve bir polimerizasyon başlatıcı ile karıştırılır. Bu karışım daha sonra bir jel döküm tepsisine dökülür ve katı bir jel oluşturacak şekilde polimerleşmesine izin verilir. Akrilamid konsantrasyonu, çözülebilecek moleküllerin boyut aralığını belirler; daha büyük moleküller için daha düşük konsantrasyonlar ve daha küçük moleküller için daha yüksek konsantrasyonlar uygundur.
Jel katılaştıktan sonra, bir güç kaynağına bağlı iki elektrottan oluşan bir elektroforez aparatına dikey olarak yerleştirilir. Jel, elektriği ileten bir tampon çözeltisine batırılır. Tipik olarak bir yükleme tamponu ile karıştırılan, ilgilenilen biyomolekülleri içeren numuneler, jelde oluşturulan kuyucuklara yüklenir.
Bir elektrik akımı uygulandığında biyomoleküller jel matrisi boyunca hareket eder. Göç, biyomoleküllerin taşıdığı elektrik yükü ve bunların jel matriks ile etkileşimi nedeniyle meydana gelir. Küçük moleküller jelin gözenekleri boyunca daha hızlı hareket ederken, daha büyük moleküller engellenir ve daha yavaş hareket eder.
Elektroforez işleminden sonra jel, ayrılan biyomolekülleri görselleştirmek ve tespit etmek için spesifik boyalarla boyanabilir veya antikorlarla işlenebilir. Ortaya çıkan jel görüntüsü veya bantlanma modeli, numunedeki moleküllerin boyutu, şekli ve göreceli bolluğu hakkında bilgi sağlayabilir. Araştırmacılar genellikle proteinleri tanımlamak, protein komplekslerini analiz etmek, protein saflığını değerlendirmek ve nükleik asit parçalarının boyutunu belirlemek için PAGE'yi kullanır.
ETİKETLER :