poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE), proteinleri, nükleik asitleri ve diğer makromolekülleri boyutlarına ve yüklerine göre ayırmak ve analiz etmek için biyokimya, moleküler biyoloji ve analitik kimyada yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Poliakrilamid bu teknikte kullanılan jel matrisidir.

İşte sürece ilişkin bir genel bakış:

1. Jel Hazırlama: Poliakrilamid jeller, akrilamid ve bisakrilamid monomerlerinin polimerleştirilmesiyle oluşturulur. Akrilamid jel yapısını sağlarken, bisakrilamid çapraz bağlama maddesi görevi görür. Bisakrilamid yüzdesi, jelin gözenek boyutunu belirler ve farklı moleküler ağırlık aralıkları için ayırma çözünürlüğünü etkiler. Jel tipik olarak dikey veya yatay formatta dökülür.

2. Numune Yükleme: Ayrılacak molekülleri içeren numuneler, molekülleri denatüre etmek ve doğrusallaştırmak için bir denatüre edici ajan (örn., sodyum dodesil sülfat - SDS) ve bir indirgeyici ajan (örn., β-merkaptoetanol) ile karıştırılır. Karışım tipik olarak proteinleri daha da denatüre etmek için ısıtılır. Elektroforez sırasında hareketi kolaylaştırmak için numunelere bir elektrik yükü eklenir.

3. Elektroforez: Jel, bir tampon çözeltisine batırılır ve iki elektrot arasına yerleştirilir. Negatif yüklü moleküller, bir elektrik alanının etkisi altında jel matrisi boyunca pozitif yüklü elektroda (anot) doğru hareket eder. Göç hızı moleküllerin boyutuna ve yüküne göre belirlenir. Daha küçük moleküller daha hızlı hareket eder ve daha uzağa göç ederken, daha büyük moleküller daha yavaştır ve yükleme pozisyonuna daha yakın kalır.

4. Görselleştirme: Elektroforez sonrasında ayrılan moleküller, analiz edilen molekül tipine özel boyama yöntemleri kullanılarak görselleştirilir. Örneğin, proteinler Coomassie Brilliant Blue veya gümüş boyama ile boyanabilirken, nükleik asitler etidyum bromür veya floresan boyalarla görüntülenebilir. Boyalı jel daha sonra fotoğraflanır veya analiz için taranır.

5. Yorumlama: Jel üzerinde ortaya çıkan desen veya bantlama profili, ayrılan moleküllerin boyutu, miktarı ve saflığı hakkında bilgi çıkarmak için analiz edilir. Bilinen boyutlardaki moleküler ağırlık belirteçleri, bilinmeyen moleküllerin yaklaşık boyutunun belirlenmesine yardımcı olmak için genellikle jelin üzerine dahil edilir.

poliakrilamid jel elektroforezi, protein analizi, DNA dizilimi, moleküler klonlama ve enzim kinetiğinin incelenmesi dahil olmak üzere çeşitli uygulamalarda kullanılabilen çok yönlü bir tekniktir. Araştırmacıların makromolekülleri benzersiz özelliklerine göre ayırmasına ve görselleştirmesine olanak tanıyarak yapılarının ve işlevlerinin daha iyi anlaşılmasını sağlar.